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蛋白组学和蛋白质化学


  随着生物制药产品在市场上的快速增长,对蛋白质组学研究中更快速、更有效的结构阐明方法的需求越来越大。在这个工作流程中有一个小而关键的步骤,那就是二硫键的还原。传统的方法是使用化学方法来实现这一点。Antec开发了用于自动在线二硫化物键还原的ROXY反应器。
  该方法是基于一个电势来触发还原反应,不使用还原性化学品。传统上,还原是使用化学品进行的,例如二硫苏糖醇(DTT),需要在LC/MS分析之前去除。此外,也可以使用无硫醇还原剂,如TCEP(三(2-羧乙基)膦)。化学法样品制备是费力的,很难与在线LC/MS相结合。用质谱在线设置的电化学是干净的,不需要化学品,结果可以即时监测。

蛋白质的结构阐明

  EC/MS的另一个应用领域是快速发展的生物制药研究领域。生物制药是利用生物技术在生命系统中生产的药物。它们是复杂的、高分子量的蛋白质,如融合蛋白、生物亲和蛋白、抗体(mAbs)和抗体-药物偶联物(adc)。

  随着越来越多的生物药物出现在市场上,对高效和自动化的结构阐明策略的需求日益增长。这可能是一个相当大的挑战。不仅仅是初级结构,氨基酸的定位是重要的。它还涉及由内部二硫键和翻译后修饰(如磷酸化、乙酰化和糖基化等)所定义的高级结构(HOS)。结构是生物活性的定义(综述:D. Virág等,2020)。

  蛋白质中的二硫键具有稳定性和可折叠性,因此对蛋白质的生物学功能至关重要。例如,在单克隆抗体中,二硫键将小而重的链连接在一起。因此,在蛋白质治疗中验证二硫化物的位置和连通性是很重要的。这通常是通过还原二硫键和分析质谱的变化来实现的(综述:J. Lakudb等人,2018)。

  电化学还原可以通过在与ms连接的在线设置中使用EC反应器自动化这样的工作流程。这是生物制药结构阐明挑战中的一小步,但具有重要意义(C. Cramer at al, 2015)。

应用文献下载

  https://antecscientific.com/solutions/applications/disulfide-bond-reduction/